實(shí)驗(yàn)室鑒定溶血性鏈球菌的方法及核心流程與關(guān)鍵步驟！
小楊 / 2025-09-03 09:56:29
百歐博偉生物：實(shí)驗(yàn)室鑒定
溶血性鏈球菌需結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、培養(yǎng)特性分析、生化反應(yīng)檢測(cè)及血清學(xué)試驗(yàn)，通過(guò)多維度驗(yàn)證確保鑒定準(zhǔn)確性，核心流程可分為以下 5 個(gè)關(guān)鍵步驟：
一、形態(tài)學(xué)鑒定（初步篩選）
涂片與染色：取待檢標(biāo)本（如咽拭子、膿液、血培養(yǎng)菌落等）涂片，經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢。
典型特征：呈革蘭氏陽(yáng)性球菌，直徑 0.6-1.0μm，排列成鏈狀（液體培養(yǎng)基中鏈更長(zhǎng)，固體培養(yǎng)基中鏈較短），無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛，部分菌株可見(jiàn)莢膜。
意義：排除革蘭氏陰性菌（如
淋球菌）或非鏈狀排列的革蘭氏陽(yáng)性菌（如
葡萄球菌），縮小鑒定范圍。
二、培養(yǎng)特性與溶血試驗(yàn)（核心區(qū)分）
溶血性鏈球菌的關(guān)鍵特征的是血平板上的溶血現(xiàn)象，需嚴(yán)格控制培養(yǎng)條件：
培養(yǎng)基選擇：使用含 5%-10% 羊血的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（羊血對(duì)溶血素敏感性高，避免用兔血、人血）。
培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?環(huán)境培養(yǎng) 18-24 小時(shí)（CO?可促進(jìn)菌落生長(zhǎng)及溶血環(huán)清晰顯現(xiàn)，避免厭氧環(huán)境，因該菌為需氧 / 兼性厭氧）。
溶血類型判斷（直接區(qū)分“溶血性鏈球菌”類別）：
乙型溶血性鏈球菌（目標(biāo)菌，致病性最強(qiáng)）：菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán)（β- 溶血），菌落呈灰白色、半透明、表面光滑、直徑 0.5-0.75mm，邊緣整齊。
甲型溶血性鏈球菌（條件致病菌）：菌落周圍呈草綠色不完全溶血環(huán)（α- 溶血），可排除；
丙型鏈球菌（無(wú)致病性）：無(wú)溶血環(huán)，直接排除。
三、生化反應(yīng)試驗(yàn)（進(jìn)一步確認(rèn)）
通過(guò)生化反應(yīng)區(qū)分鏈球菌屬內(nèi)不同群（如 A 群、B 群等，對(duì)人致病以 A 群為主），常用關(guān)鍵試驗(yàn)：
試驗(yàn)項(xiàng)目 結(jié)果（
溶血性鏈球菌，以 A 群為例） 目的
觸酶試驗(yàn) 陰性 區(qū)分鏈球菌（觸酶陰性）與葡萄球菌（觸酶陽(yáng)性），避免混淆。
桿菌肽敏感試驗(yàn) 陽(yáng)性（A 群特征） 快速篩選 A 群乙型溶血性鏈球菌。
CAMP 試驗(yàn) 陰性 區(qū)分 B 群與 A 群（陰性），明確致病群別。
菊糖發(fā)酵試驗(yàn) 陰性 排除肺炎鏈球菌（菊糖發(fā)酵陽(yáng)性）。
膽汁溶菌試驗(yàn) 陰性 同上，進(jìn)一步排除肺炎鏈球菌（膽汁溶菌陽(yáng)性）。
四、血清學(xué)試驗(yàn)（最終定型，明確群別）
若需精準(zhǔn)鑒定鏈球菌的“群”（如 A 群、B 群），需進(jìn)行血清學(xué)分群試驗(yàn)（基于細(xì)胞壁多糖抗原差異）：
原理：利用特異性抗血清（如抗 A 群、抗 B 群血清）與細(xì)菌細(xì)胞壁抗原結(jié)合，出現(xiàn)凝集反應(yīng)。
操作：取血平板上純菌落，制成菌懸液，與對(duì)應(yīng)群別抗血清混合，若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集顆粒，即為該群鏈球菌（如與抗 A 群血清凝集，則為 A 群溶血性鏈球菌）。
意義：明確致病群別（如 A 群致猩紅熱、咽炎，B 群致新生兒敗血癥），為臨床治療和流行病學(xué)分析提供依據(jù)。
五、分子生物學(xué)方法（快速 / 精準(zhǔn)鑒定，可選）
對(duì)于復(fù)雜標(biāo)本（如混合感染、難培養(yǎng)菌株）或需快速確診的場(chǎng)景，可采用分子生物學(xué)技術(shù)：
PCR 檢測(cè)：針對(duì) A 群鏈球菌的特異性基因（如鏈球菌溶血素 O 基因slo、致熱外毒素基因spe）設(shè)計(jì)引物，通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物判斷是否為目標(biāo)菌，靈敏度高（可檢測(cè) 10²-10³ CFU/mL），耗時(shí)僅 2-3 小時(shí)，適合應(yīng)急檢測(cè)。
質(zhì)譜分析：通過(guò)檢測(cè)細(xì)菌蛋白質(zhì)圖譜，與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，可直接鑒定到“種”或“群”，分辨率高、重復(fù)性好，已逐漸成為實(shí)驗(yàn)室快速鑒定的主流方法。
六、關(guān)鍵避坑點(diǎn)
溶血環(huán)誤判：血平板需新鮮制備（羊血添加后 24 小時(shí)內(nèi)使用），避免血球陳舊導(dǎo)致溶血環(huán)模糊；培養(yǎng)時(shí)間不可超過(guò) 24 小時(shí)，否則菌落過(guò)大可能掩蓋溶血環(huán)。
生化試驗(yàn)干擾：桿菌肽紙片需含準(zhǔn)確濃度（0.04U，而非 0.05U），且菌懸液濃度需適中（麥?zhǔn)?0.5 濁度），否則易出現(xiàn)假耐藥 / 假敏感。
污染控制：操作全程無(wú)菌，避免標(biāo)本污染葡萄球菌（觸酶陽(yáng)性，易誤判），鑒定前需挑取單個(gè)菌落純化培養(yǎng) 1-2 代。
通過(guò)以上步驟，可高效、準(zhǔn)確地鑒定出具有致病性的
溶血性鏈球菌（尤其是 A 群乙型溶血性鏈球菌），為后續(xù)藥敏試驗(yàn)和臨床診療提供可靠依據(jù)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買(mǎi)等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來(lái)詢！
下載附件
上一篇：標(biāo)準(zhǔn)菌株、工作菌株與質(zhì)控菌株的篩選和鑒定方法有哪些？
下一篇：印度芽孢桿菌的形態(tài)特征與作用及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用！