TGC培養(yǎng)基：廣泛應(yīng)用于臨床微生物學(xué)和工業(yè)微生物檢測(cè)
小楊 / 2025-07-09 09:28:47
TGC 培養(yǎng)基（Thioglycollate Medium）是一種用于培養(yǎng)厭氧、微需氧和需氧微生物的通用液體培養(yǎng)基，尤其適用于厭氧菌的分離、培養(yǎng)和活力檢測(cè)。其核心原理是通過(guò)化學(xué)物質(zhì)創(chuàng)造梯度氧環(huán)境，滿足不同氧需求微生物的生長(zhǎng)，廣泛應(yīng)用于臨床微生物學(xué)和工業(yè)微生物檢測(cè)。
一、TGC 培養(yǎng)基的原理
TGC 培養(yǎng)基的核心設(shè)計(jì)圍繞 “氧梯度環(huán)境” 構(gòu)建，主要通過(guò)以下成分實(shí)現(xiàn)：
1、硫代乙醇酸鈉（Thioglycollate）
這是培養(yǎng)基的關(guān)鍵成分，作為還原劑可消耗環(huán)境中的氧氣，降低培養(yǎng)基的氧化還原電位。其濃度通常為 0.05%~0.2%，能在培養(yǎng)基中形成從表面到底部的氧梯度：
培養(yǎng)基表層因接觸空氣，氧氣含量較高，適合需氧菌生長(zhǎng)；
中層氧氣含量較低，適合微需氧菌生長(zhǎng)；
底層幾乎無(wú)氧（還原環(huán)境），適合厭氧菌生長(zhǎng)。
2、瓊脂（Agar）
通常添加 0.05%~0.1% 的低濃度瓊脂，其作用是減緩培養(yǎng)基中氧氣的擴(kuò)散速度，穩(wěn)定氧梯度，避免因震蕩導(dǎo)致氧氣分布均勻化。
3、營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)成分
含胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、葡萄糖等，提供微生物生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、維生素和礦物質(zhì)，滿足各類微生物的營(yíng)養(yǎng)需求。
4、指示劑（可選）
部分配方添加亞甲藍(lán)或刃天青作為氧化還原指示劑：
有氧環(huán)境中呈藍(lán)色（亞甲藍(lán)）或粉紅色（刃天青）；
無(wú)氧環(huán)境中呈無(wú)色，可直觀判斷培養(yǎng)基的還原狀態(tài)和氧梯度位置。
二、TGC 培養(yǎng)基的使用方法
1、培養(yǎng)基的制備
配方（典型）：胰酪蛋白胨 15g、大豆蛋白胨 5g、葡萄糖 5g、氯化鈉 2.5g、硫代乙醇酸鈉 0.5g、瓊脂 0.75g、水 1000mL，pH 調(diào)至 7.2±0.2（25℃）。
制備步驟：
按配方稱量各成分，溶于蒸餾水中，加熱溶解；
分裝于試管（約 15mL / 管）或錐形瓶中，121℃高壓蒸汽滅菌 15 分鐘；
滅菌后趁熱直立放置，冷卻至室溫（此時(shí)瓊脂凝固，形成直立的柱狀培養(yǎng)基）；
若含指示劑，新鮮培養(yǎng)基應(yīng)呈無(wú)色或淡粉色（若表層氧化呈藍(lán)色 / 粉紅色，可在 80℃水浴中加熱 10 分鐘還原，冷卻后使用）。
2、接種方法
樣本類型：適用于臨床標(biāo)本（如血液、膿液、組織勻漿）、食品樣品或環(huán)境樣品中各類微生物的培養(yǎng)。
操作步驟：
用無(wú)菌接種針或吸管取待檢樣本，垂直刺入培養(yǎng)基底部（避免過(guò)度攪動(dòng)，防止破壞氧梯度）；
若為液體樣本，可直接滴加 1~2 滴于培養(yǎng)基表面或深層；
接種后輕輕混勻（僅表層輕微晃動(dòng)），避免氧梯度紊亂。
3、培養(yǎng)條件
溫度：通常 35~37℃培養(yǎng)，部分微生物（如嗜冷菌）需調(diào)整至 20~25℃。
時(shí)間：根據(jù)目標(biāo)菌生長(zhǎng)速度而定，厭氧菌一般需培養(yǎng) 48~72 小時(shí)，需氧菌可在 24~48 小時(shí)觀察結(jié)果。
觀察指標(biāo)：
需氧菌：多在培養(yǎng)基表層生長(zhǎng)，形成渾濁或菌膜；
微需氧菌：在培養(yǎng)基中層（氧含量較低區(qū)域）生長(zhǎng)；
厭氧菌：在培養(yǎng)基底層（無(wú)氧區(qū)域）生長(zhǎng)，形成沉淀或渾濁。
4、注意事項(xiàng)
避免反復(fù)開(kāi)蓋：接種和觀察時(shí)減少試管開(kāi)蓋次數(shù)，防止氧氣大量進(jìn)入破壞底層厭氧環(huán)境。
新鮮度：培養(yǎng)基需現(xiàn)配現(xiàn)用，存放時(shí)間不宜超過(guò) 1 周（4℃冷藏），若指示劑顯示表層氧化范圍過(guò)大（超過(guò) 1/3），需重新加熱還原后使用。
無(wú)菌操作：嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免污染，否則可能掩蓋目標(biāo)菌的生長(zhǎng)。
三、應(yīng)用場(chǎng)景
微生物鑒定：通過(guò)細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)位置，初步判斷其氧需求類型（需氧、厭氧、微需氧）。
無(wú)菌檢查：用于藥品、生物制品的厭氧菌無(wú)菌性檢測(cè)，確保無(wú)厭氧致病菌污染。
TGC 培養(yǎng)基的核心優(yōu)勢(shì)在于 “一管多能”，無(wú)需單獨(dú)設(shè)置厭氧環(huán)境即可同時(shí)培養(yǎng)不同氧需求的微生物，操作簡(jiǎn)便且成本低，是微生物實(shí)驗(yàn)室常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基之一。
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