銅綠假單胞菌增菌肉湯的工作原理和使用方法及應(yīng)用研究！
小楊 / 2025-05-14 09:49:38
銅綠假單胞菌增菌肉湯是一種選擇性液體培養(yǎng)基，用于從復(fù)雜樣本（如臨床標(biāo)本、環(huán)境樣本或食品）中富集和選擇性培養(yǎng)
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。以下是其原理和使用方法的詳細(xì)說(shuō)明：
一、原理
1、選擇性抑制
培養(yǎng)基中添加溴棕三甲銨或其他抑制劑，可抑制大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)，但對(duì)
銅綠假單胞菌的抑制作用較弱，從而實(shí)現(xiàn)選擇性富集。
2、營(yíng)養(yǎng)支持
含有蛋白胨、甘油等成分，提供銅綠假單胞菌生長(zhǎng)所需的碳源、氮源和能量，促進(jìn)其快速增殖。
3、代謝指示
銅綠假單胞菌代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生綠膿菌素（Pyocyanin）和熒光素（Pyoverdine），使培養(yǎng)基呈現(xiàn)藍(lán)綠色熒光或綠色色素（需紫外燈觀察）。
二、使用方法
1、樣本處理與接種
樣本類型：水樣、拭子、組織、食品等。
前處理：
液體樣本（如水）可直接接種；固體樣本需均質(zhì)后取懸液。
若樣本中菌量低，可先預(yù)增菌（如緩沖蛋白胨水）。
接種量：按1:10比例將樣本加入肉湯（如10 mL肉湯接種1 mL樣本）。
2、培養(yǎng)條件
溫度：35–37°C
時(shí)間：18–24小時(shí)（若菌量低，可延長(zhǎng)至48小時(shí)）
需氧條件：靜置培養(yǎng)或輕微振蕩。
3、結(jié)果觀察
渾濁度：陽(yáng)性樣本肉湯變渾濁。
色素產(chǎn)生：
肉眼可見(jiàn)藍(lán)綠色或黃綠色（綠膿菌素）。
紫外燈下（365 nm）觀察熒光（熒光素）。
陰性結(jié)果：澄清無(wú)變化。
4、確認(rèn)試驗(yàn)
取培養(yǎng)液劃線接種至選擇性瓊脂，35°C培養(yǎng)18–24小時(shí)。
典型菌落特征：扁平、邊緣不規(guī)則、產(chǎn)生色素或熒光。
進(jìn)一步生化鑒定（如氧化酶試驗(yàn)、42°C生長(zhǎng)試驗(yàn)、分子檢測(cè)等）。
三、注意事項(xiàng)
1、質(zhì)量控制
2、干擾因素
樣本中高濃度抑制劑（如抗生素）可能影響增菌效果。
某些假單胞菌（如
熒光假單胞菌）可能產(chǎn)生類似色素，需結(jié)合生化鑒定。
3、儲(chǔ)存與保質(zhì)期
未開(kāi)封干粉培養(yǎng)基常溫保存，配制后冷藏（2–8°C）并在1個(gè)月內(nèi)使用。
四、應(yīng)用場(chǎng)景
臨床：檢測(cè)傷口感染、呼吸道標(biāo)本中的銅綠假單胞菌。
環(huán)境監(jiān)測(cè)：醫(yī)院用水系統(tǒng)（如水管、呼吸機(jī)）的污染檢測(cè)。
食品工業(yè)：評(píng)估飲用水或原料的微生物安全性。
通過(guò)選擇性增菌，該肉湯可顯著提高
銅綠假單胞菌的檢出率，尤其適用于低菌量或含競(jìng)爭(zhēng)菌群的復(fù)雜樣本。
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