細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基的工作原理與使用方法及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-05-07 10:01:59
一、原理
1、特異性酶-底物反應(yīng)：
顯色培養(yǎng)基中添加了特定的顯色底物（如熒光素、色原物質(zhì)），這些底物與細(xì)菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生的酶（如β-葡萄糖苷酶、β-半乳糖苷酶）特異性結(jié)合。當(dāng)目標(biāo)菌的酶分解底物時(shí)，釋放出色原或熒光物質(zhì)，使菌落呈現(xiàn)特定顏色。
2、選擇性抑制與促生長(zhǎng)：
培養(yǎng)基可能含有選擇性抑制劑（如膽鹽、抗生素）抑制非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)。
添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如碳源、氮源）促進(jìn)目標(biāo)菌增殖，提高檢測(cè)靈敏度。
3、顏色區(qū)分與快速鑒定：
不同菌種因代謝差異產(chǎn)生不同顏色，無(wú)需額外生化試驗(yàn)即可初步鑒定，縮短檢測(cè)時(shí)間（如18-24小時(shí)出結(jié)果）。
二、使用方法
1、培養(yǎng)基準(zhǔn)備：
按照說(shuō)明書(shū)配制，滅菌后傾注平板（或使用預(yù)裝平板）。
若為干粉培養(yǎng)基，需用純水溶解并高壓滅菌（注意溫度避免成分破壞）。
2、樣品處理與接種：
樣品稀釋：液體樣品直接接種；固體樣品需均質(zhì)后梯度稀釋（如10倍系列稀釋）。
接種方式：
涂布法：取0.1-0.2 mL樣品涂布于平板表面。
傾注法：將1 mL樣品與熔化的培養(yǎng)基混勻后傾注（適用于高菌量樣品）。
3、培養(yǎng)條件：
溫度：根據(jù)目標(biāo)菌選擇（常見(jiàn)35-37℃）。
時(shí)間：通常18-24小時(shí)（部分慢速菌需延長(zhǎng)至48小時(shí)）。
需氧/厭氧：需氧培養(yǎng)為主，厭氧菌需特殊條件。
4、結(jié)果判讀：
計(jì)數(shù)規(guī)則：
僅計(jì)數(shù)符合目標(biāo)菌顏色特征的菌落。
選擇菌落數(shù)30-300的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
交叉驗(yàn)證：必要時(shí)通過(guò)鏡檢、PCR或生化試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果。
三、注意事項(xiàng)
1、質(zhì)量控制：
陰性對(duì)照（無(wú)菌水）與陽(yáng)性對(duì)照（含目標(biāo)菌的樣品）需同步檢測(cè)。
2、保存與有效期：
未開(kāi)封干粉需避光、干燥保存（通常2-25℃，有效期2年）。
配制后的培養(yǎng)基冷藏（2-8℃）并1周內(nèi)使用，避免反復(fù)凍融。
3、干擾因素：
樣品成分：高鹽、強(qiáng)酸/堿性樣品可能抑制顯色反應(yīng)，需調(diào)整pH或稀釋。
雜菌競(jìng)爭(zhēng)：過(guò)量非目標(biāo)菌可能掩蓋顯色結(jié)果，需優(yōu)化稀釋度。
4、局限性：
無(wú)法區(qū)分死菌與活菌（需結(jié)合ATP檢測(cè)）。
部分近緣菌種顏色相近（如某些腸球菌與鏈球菌），需進(jìn)一步鑒定。
四、應(yīng)用場(chǎng)景
快速篩查：食品、水質(zhì)、醫(yī)療環(huán)境中的衛(wèi)生指標(biāo)菌（如大腸菌群）。
臨床診斷：尿液、分泌物樣本的病原菌初步鑒定（如尿路感染中的
大腸桿菌）。
工業(yè)微生物控制：生產(chǎn)線微生物污染監(jiān)測(cè)。
通過(guò)顯色培養(yǎng)基，可實(shí)現(xiàn)高效、直觀的細(xì)菌檢測(cè)，顯著提升實(shí)驗(yàn)室工作效率。
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