細胞室培養(yǎng)支原體污染的處理方法與操作步驟及建議！
小楊 / 2025-04-01 09:38:46
細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)
支原體污染是一個常見但嚴重的問題，因為支原體難以檢測且容易擴散。以下是處理支原體污染的步驟和建議：
一、確認污染
1、檢測方法：使用特異性檢測手段（如PCR、支原體檢測試劑盒、熒光染色或DNA染色法）確認污染。
2、常見跡象：細胞生長緩慢、培養(yǎng)基pH異常（頻繁變黃）、細胞形態(tài)改變，但普通顯微鏡下難以直接觀察到支原體。
二、立即隔離污染源
1、停止操作：暫停所有涉及污染細胞的操作，避免交叉污染。
2、隔離物品：將污染的細胞、培養(yǎng)基、耗材單獨存放，并貼上明顯標簽。
3、專用區(qū)域：污染區(qū)域應(yīng)與其他培養(yǎng)區(qū)分開，操作時佩戴手套并更換實驗服。
三、處理被污染的細胞
1、直接丟棄：支原體極難徹底清除，建議將污染的細胞高壓滅菌后廢棄，尤其是珍貴細胞可通過凍存后單獨標記隔離。
2、嘗試清除（風(fēng)險較高）：
抗生素處理：使用支原體清除試劑（如Plasmocin™、BM-Cyclin），但可能需持續(xù)數(shù)周，且可能改變細胞特性。
聯(lián)合用藥：大環(huán)內(nèi)酯類（如泰樂菌素）聯(lián)合四環(huán)素類抗生素，需嚴格驗證清除效果。
四、徹底清潔實驗室環(huán)境
1、消毒劑處理：用含5%過氧化氫、0.5% Triton X-100或?qū)Ｓ弥гw清除劑（如MYP™）擦拭超凈臺、培養(yǎng)箱、冰箱等。
2、紫外線照射：對操作臺、培養(yǎng)箱內(nèi)部進行30分鐘以上紫外照射。
3、高壓滅菌：污染的吸頭、培養(yǎng)瓶等耗材需高壓滅菌（121℃, 30分鐘）。
4、熏蒸消毒：嚴重污染時，可用甲醛或過氧化氫蒸汽熏蒸實驗室。
五、更換試劑與耗材
1、丟棄可疑試劑：污染的培養(yǎng)基、胰酶等液體需滅菌后廢棄。
2、分裝使用：新試劑應(yīng)分裝成小份，避免反復(fù)使用同一瓶試劑導(dǎo)致污染擴散。
3、濾器滅菌：支原體可通過0.1-0.2 μm濾膜，需確保濾膜完好且滅菌徹底。
六、預(yù)防未來污染
1、嚴格無菌操作：
操作時佩戴口罩、手套，定期更換實驗服。
避免徒手接觸培養(yǎng)瓶口或吸管尖端。
使用帶濾芯的槍頭。
2、定期檢測：對新購入細胞、長期培養(yǎng)細胞每1-2個月進行一次支原體檢測。
3、分區(qū)域操作：將細胞培養(yǎng)、試劑配制、污染物處理分不同區(qū)域進行。
4、預(yù)防性抗生素：可短期使用支原體抑制劑（如Plasmocin™ Prophylactic），但長期使用可能掩蓋污染。
七、其他注意事項
1、交叉污染風(fēng)險：若同一實驗室其他細胞株可能暴露，需全面檢測所有細胞。
2、細胞來源管理：從可靠機構(gòu)獲取細胞，避免引入污染源。
3、人員培訓(xùn)：加強實驗室成員的無菌意識，定期演練污染處理流程。
總結(jié)：支原體污染難以完全清除，重點在于快速隔離、徹底消毒和嚴格預(yù)防。若污染范圍廣或涉及珍貴細胞，建議尋求專業(yè)生物安全團隊協(xié)助處理。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關(guān)人士進行維護,確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因為此，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：羊原代腎小管上皮細胞的培養(yǎng)與應(yīng)用及注意事項！
下一篇：嗜松青霉的分類與形態(tài)特征及應(yīng)用價值與研究進展！