| 質(zhì)粒簡介 |
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的質(zhì)粒載體，其結(jié)構(gòu)組成緊湊，幾乎不含多余的 DNA片段，GenBank注冊號為 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而來，其中 lacZ (MSC)來自 M13mp18/19 。這兩個質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)幾乎是完全一樣的，只是多克隆位點的排列方向相反。這些質(zhì)粒缺乏控制拷貝數(shù)的 rop 基因，因此其拷貝數(shù)達(dá) 500-700 。 pUC 系列載體含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分編碼序列，在特定的受體細(xì)胞中可表現(xiàn) α-互補(bǔ)作用。因此在多克隆位點中插入了外源片段后，可通過 α-互補(bǔ)作用形成的藍(lán)色和白色菌落篩選重組 質(zhì)粒。pUC18、pUC19載體適合于DNA片段的克隆、進(jìn)行DNA測序、對外源基因進(jìn)行表達(dá)等。由于在lacZ領(lǐng)域中含有多克隆位點，因此在以lacZ缺欠細(xì)胞作為宿主 (如：JM109等) 進(jìn)行轉(zhuǎn)化后，在含有IPTG、X-Gal 的平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)時，可以很容易地通過藍(lán)白篩選，判斷載體中有無DNA片段的插入。同時還可以通過載體上的lac promoter表達(dá)外源基因，對插入載體中的DNA片段進(jìn)行測序等。進(jìn)行DNA測序時，可以方便地使用M13系列的通用引物。 |
