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黃曲霉毒素B1檢測試紙卡使用說明書

方法編號：CDC-5512

1.適用范圍與檢測意義：本品適用于谷物、飼料、食用油、調(diào)料和發(fā)酵酒等物質(zhì)中黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1簡寫為AFB1）的快速檢測。黃曲霉毒素B1是目前已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性很強(qiáng)的一種，對人和若干動物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對肝臟的損害。黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項目之一。

2.測定原理：本品采用高度特異性抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，通過單克隆抗體競爭結(jié)合AFB1-BSA偶聯(lián)物和樣品中可能含有的AFB1的原理。試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的AFB1-BSA偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗AFB1單克隆抗體。檢出限為5ng/ml。

3.所用器皿：常量天平±0.1g；蒸發(fā)皿或燒杯；量筒；滴管；移液管；小型粉碎機(jī)；離心機(jī)等。

4.樣品制備

4.1谷物與飼料：取5g以上有代表性樣品并充分粉碎，準(zhǔn)確稱取2.0g均勻試樣于15ml離心管中，向離心管中準(zhǔn)確加入2ml純凈水和8.0ml的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩5min，4000rpm離心1分鐘，將上清液用吸管吸出2.0ml到小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干液體，根據(jù)不同樣品對黃曲霉毒素B1（AFB1）的限量標(biāo)準(zhǔn)要求不同，參考下表將不同體積的稀釋液加入到已吹干的杯子中，用吸管反復(fù)沖洗杯底和杯壁，使殘渣徹底溶解，此溶解液即為樣品檢測液。

谷物中AFB1限量（ppb） 5 10 20 30 40 50 100

使用稀釋液體積（ml） ０.４ ０.８ １.６ ２.４ ３.２ ４ ８

稀釋液滴瓶滴數(shù)（滴） 8 16 32 48 64 80 160

4.2食用油：稱取2.0g油樣于小燒杯中，用8ml正己烷分次將試樣轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，準(zhǔn)確加入4ml純凈水充分振蕩3min,吸去上層正己烷層,再加入4ml的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩5min，靜置或離心得上清液，將上清液吸出2ml到小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干，參照表格，根據(jù)AFB1限量，量取相應(yīng)體積稀釋液復(fù)溶杯底固體。此溶解液即為檢測液。

食用油中AFB1限量（ppb） 5 10 20 30 40 50 100

使用稀釋液體積（ml） 0.6 1.2 2.4 3.6 4.8 6.0 12.0

稀釋液滴瓶滴數(shù)（滴） 12 24 48 72 96 120 240

4.3醬油、醋：準(zhǔn)確量取2.0ml樣品于15ml離心管中，準(zhǔn)確加入4.0ml乙酸乙脂，塞緊瓶塞后充分震蕩5min，靜置1~2min，待溶液分層以后將上清夜用移液槍（或移液管，吸管）全部轉(zhuǎn)移到另一只15ml離心管中，加入2.0ml 0.05M Na2CO3溶液，充分震蕩3min，用吸管取2mL上清液到小玻璃杯中，吹干濾液，參照表格，根據(jù)AFB1限量，量取相應(yīng)體積稀釋液復(fù)溶杯底固體。

此溶解液即為檢測液。

醬油、醋中AFB1限量（ppb） 5 10 20 30 40 50 100

使用稀釋液體積（ml） 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10 20

稀釋液滴瓶滴數(shù)（滴） 20 40 80 120 160 200 400 4.3

發(fā)酵酒：準(zhǔn)確量取2.0ml樣品于15ml離心管中，準(zhǔn)確加入4.0ml乙酸乙脂，塞緊瓶塞后充分震蕩5min，靜置1~2min，待溶液分層以后用吸管取2mL上清液到小玻璃杯中，吹干濾液，參照食用油樣品制備表格，根據(jù)AFB1限量，量取相應(yīng)體積稀釋液復(fù)溶杯底固體。此溶解液即為檢測液。

5測定

5.1 使用前將試紙卡和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫。

5.2 從原包裝袋中取出試紙卡，打開后平放在桌面上，在1小時內(nèi)盡快地使用。

5.3 用滴管吸取待檢樣品溶液，滴加3滴于加樣孔中，加樣后開始計時。

5.4 結(jié)果應(yīng)在5min時讀取，超過10min的時間判讀無效。 6結(jié)果判定

6.1陽性：C線顯色，T線不顯色，判為陽性。

6.2陰性：C線顯色，T線肉眼可見，無論顏色深淺均判為陰性。

6.3無效：C線不顯色，無論T線是否顯色，該試紙均判為無效。

7說明 7.1本品為一次性產(chǎn)品，勿重復(fù)使用。

7.2如遇稀釋液不足，可用蒸餾水加入稀釋液中混勻后使用。

7.3本品為篩選方法，任何陽性結(jié)果請用其它方法作進(jìn)一步確認(rèn)。

7.4有條件的實(shí)驗(yàn)室可以用AFB1標(biāo)準(zhǔn)品作為判斷參考。

7.5本品應(yīng)保存在干燥陰涼處（4-30℃），有效期18個月。

8包裝：試紙卡5片，稀釋液1瓶，15ml離心管1支。