基本信息
啟動子:CspA promoter
復(fù)制子:F1 ori,ori
質(zhì)粒分類:大腸系列質(zhì)粒;大腸表達(dá)質(zhì)粒;pCold系列質(zhì)粒
質(zhì)粒大小:4377bp
原核抗性:氨芐青霉素Amp(100μg/ml)
克隆菌株:DH5α等大腸桿菌
培養(yǎng)條件:37℃,有氧,LB
表達(dá)宿主:BL21等大腸桿菌
培養(yǎng)條件:37℃,有氧,LB
誘導(dǎo)方式:IPTG或乳糖及其類似物
5'測序引物:pCold-F(ACGCCATATCGCCGAAAGG)
3'測序引物:pCold-R(GGCAGGGATCTTAGATTCTG)
質(zhì)粒簡介
pCold III質(zhì)粒是利用冷休克基因CspA啟動子設(shè)計高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。在啟動子下游處,插入了lac操縱子,以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外,5’非翻譯區(qū)(5’UTR),翻譯增強(qiáng)元件(TEE),His標(biāo)簽序列,Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)(MCS)位于CAPS啟動子的下游。當(dāng)培養(yǎng)溫度切換到低溫時,大腸桿菌暫時停止生長,大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)減少,但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導(dǎo)表達(dá)。
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