別稱 | pET22b |
啟動子 | T7 |
復(fù)制子 | pBR322 |
終止子 | T7 terminator |
質(zhì)粒分類 | 大腸系列質(zhì)粒;大腸表達(dá)質(zhì)粒;pET系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小 | 5493bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽 | N-pelB,C-6×His |
原核抗性 | Amp |
克隆菌株 | DH5a |
培養(yǎng)條件 | 37℃,有氧,LB |
表達(dá)宿主 | 大腸桿菌BL21(DE3) |
誘導(dǎo)方式 | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測序引物 | T7(TAATACGACTCACTATAGGG) |
3'測序引物 | T7-ter(TGCTAGTTATTGCTCAGCGG) |
載體宿主 | 大腸桿菌 |
載體用途 | 蛋白表達(dá),分泌表達(dá) |
基因種屬 | 空載體 |
基因類型 | ORF |
原核抗性 | Amp |
質(zhì)粒簡介 | pET-22b質(zhì)粒是一種原核表達(dá)載體,N端含有一個pelB前導(dǎo)肽、C-端的His標(biāo)簽。該質(zhì)粒含有多個常用的酶切位點,便于不同基因克隆。表達(dá)由宿主細(xì)胞提供的T7 RNA聚合酶誘導(dǎo),目的基因被克隆到質(zhì)粒載體上,受噬菌體強轉(zhuǎn)錄及翻譯信號控制。T7 RNA聚合酶啟動的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的,所以在T7噬菌體聚合酶的作用下,包含有蛋白編碼序列的病毒 粒子能夠產(chǎn)生,并啟動蛋白表達(dá),同時蛋白表達(dá)將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。 pET系統(tǒng)是有史以來在大腸桿菌中表達(dá)重組蛋白的功能最強大的系統(tǒng),也是現(xiàn)今原核表達(dá)方面使用最廣泛的系統(tǒng)。該系列質(zhì)粒能很容易的通過降低誘導(dǎo)物的濃度來削弱蛋白表達(dá)。在非誘導(dǎo)條件下,可以使目的基因處于完全沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄。 |