培養(yǎng)基滅菌時(shí)不同類型培養(yǎng)基應(yīng)該如何選擇合適的滅菌方法？
小楊 / 2025-09-16 09:36:59
培養(yǎng)基的滅菌方法需根據(jù)其成分（尤其是熱敏感性成分）、理化性質(zhì)及微生物污染風(fēng)險(xiǎn)選擇，核心目標(biāo)是殺滅所有微生物（包括芽孢）同時(shí)避免有效成分被破壞。以下是不同類型培養(yǎng)基的滅菌方法選擇原則及實(shí)例：
一、高壓蒸汽滅菌（最常用，適用于耐熱成分培養(yǎng)基）
原理：在 121℃（103.4kPa）或 134℃（206.8kPa）高壓蒸汽下，通過高溫和蒸汽穿透作用殺滅微生物，包括芽孢。
適用范圍：含耐熱成分（如蛋白胨、瓊脂、鹽類、糖（單糖 / 雙糖）、氨基酸（多數(shù)）等）的培養(yǎng)基。
典型實(shí)例：
鑒別 / 選擇培養(yǎng)基：如 SS 瓊脂（含膽鹽需注意，但膽鹽在 121℃短期滅菌可耐受）、MAC 瓊脂（含乳糖和中性紅，乳糖耐熱，中性紅少量可耐受）。
固體培養(yǎng)基：含瓊脂的培養(yǎng)基（瓊脂熔點(diǎn)約 95℃，凝固點(diǎn) 40-50℃，121℃滅菌不破壞）。
滅菌參數(shù)：多數(shù)為 121℃、20-30 分鐘；含大量固體顆?；蛉莘e較大時(shí)，可延長至 30-40 分鐘。
二、過濾滅菌（適用于熱敏感成分培養(yǎng)基）
原理：用 0.22μm（或 0.1μm，針對支原體）孔徑的無菌濾膜過濾，物理性去除微生物（不依賴高溫），適用于含熱敏感成分的培養(yǎng)基。
適用范圍：含以下成分的培養(yǎng)基：
熱不穩(wěn)定生物活性物質(zhì)：抗生素（如青霉素、鏈霉素，60℃以上易分解）、維生素（如 VB1、VC，高溫易破壞）、激素、酶制劑（如溶菌酶）。
易揮發(fā) / 分解的小分子：某些糖類（如蔗糖濃度過高時(shí)易焦化，低濃度可高壓，但高濃度需過濾）、某些氨基酸（如色氨酸、胱氨酸，高溫易分解）。
血清 / 體液類：如小牛血清、腹水（含多種蛋白質(zhì)和活性因子，高溫會變性）。
典型實(shí)例：
抗生素選擇培養(yǎng)基：如含青霉素的 LB 選擇培養(yǎng)基（青霉素 100℃即失活，需過濾后加入已高壓滅菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基）。
細(xì)胞培養(yǎng)基：如 DMEM（含血清、維生素、生長因子，需先高壓滅菌基礎(chǔ)成分，再過濾添加敏感成分）。
特殊微生物培養(yǎng)基：如培養(yǎng)乳酸菌的某些培養(yǎng)基（含維生素 B 族，需過濾）。
操作要點(diǎn)：
濾膜需提前滅菌（干熱滅菌 121℃、2 小時(shí)），過濾裝置在超凈臺內(nèi)無菌操作。
通常先將培養(yǎng)基中耐熱成分高壓滅菌，冷卻至 40-50℃后，在無菌條件下加入過濾滅菌的敏感成分。
三、煮沸滅菌（適用于簡單、低風(fēng)險(xiǎn)培養(yǎng)基，少用）
原理：100℃煮沸 15-30 分鐘，殺滅繁殖體，但無法殺滅芽孢，僅適用于對無菌要求不嚴(yán)格的臨時(shí)培養(yǎng)基。
適用范圍：如臨時(shí)制備的生理鹽水（僅需殺滅一般雜菌，無需抗芽孢）、某些應(yīng)急用的簡單液體培養(yǎng)基（不作為正式檢測用）。
四、干熱滅菌（僅適用于固體培養(yǎng)基成分，極少直接用于成品培養(yǎng)基）
原理：160-180℃干熱空氣滅菌 2-3 小時(shí)，通過氧化作用殺滅微生物，適用于耐高溫、怕潮濕的固體成分。
適用范圍：通常不用于成品培養(yǎng)基（因會破壞營養(yǎng)成分），僅用于培養(yǎng)基原料（如某些干燥的蛋白胨）或玻璃器皿滅菌。
五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
復(fù)合培養(yǎng)基的分步處理：含耐熱和熱敏感成分的混合培養(yǎng)基，需采用“高壓滅菌 + 過濾滅菌”結(jié)合法。例如：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基先高壓滅菌，冷卻后在無菌條件下加入過濾滅菌的抗生素（如氨芐青霉素）。
避免過度滅菌：即使耐熱培養(yǎng)基，也需嚴(yán)格控制滅菌時(shí)間（如超過 30 分鐘可能導(dǎo)致糖焦化、氨基酸分解，影響 pH 和營養(yǎng)）。
特殊成分的替代：若某成分熱敏感且無法過濾（如某些膠體），可嘗試用耐熱類似物替代（如用葡萄糖代替蔗糖，前者更耐熱）。
綜上，滅菌方法的核心是匹配培養(yǎng)基成分的熱穩(wěn)定性：耐熱成分首選高壓蒸汽滅菌，熱敏感成分必須用過濾滅菌，簡單低風(fēng)險(xiǎn)場景可考慮煮沸滅菌。
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