細胞實驗換液的操作指南與注意事項及常見問題與處理！
小楊 / 2025-05-20 10:14:55
百歐博偉生物：在細胞培養(yǎng)實驗中，換液（更換培養(yǎng)基）是維持細胞健康的關(guān)鍵步驟，以下是詳細的換液操作指南及注意事項：
一、換液目的
清除細胞代謝廢物（如乳酸、氨等）。
補充新鮮營養(yǎng)，促進細胞生長。
避免培養(yǎng)基酸化（pH下降導(dǎo)致培養(yǎng)基變黃）。
二、換液時機
1、常規(guī)頻率：根據(jù)細胞類型調(diào)整，一般為每1-3天一次。
2、觀察信號：
培養(yǎng)基變黃（pH下降）。
細胞密度達80%以上。
培養(yǎng)基渾濁或有漂浮物（可能污染）。
三、操作步驟
1、準(zhǔn)備工作
試劑/器材：
新鮮培養(yǎng)基（37℃水浴預(yù)熱30分鐘）。
預(yù)溫的PBS（用于清洗細胞）。
移液器、無菌移液管/槍頭、廢液缸。
75%酒精噴灑超凈臺，開啟紫外滅菌30分鐘。
2、換液流程
（1）取出細胞：
從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)瓶/皿，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。
傾斜容器（如培養(yǎng)瓶），使液體集中一角，避免觸碰細胞層。
（2）棄舊培養(yǎng)基：
用移液管或真空泵（低吸力）輕柔吸棄舊培養(yǎng)基。
注意：若為懸浮細胞，需離心（如1000 rpm, 5分鐘）后再去上清。
（3）清洗細胞：
沿培養(yǎng)器皿邊緣緩慢加入預(yù)溫的PBS（體積與培養(yǎng)基相當(dāng)，如6孔板每孔加2ml）。
輕輕晃動清洗，吸棄PBS。重復(fù)1-2次（對代謝廢物多的細胞）。
（4）添加新培養(yǎng)基：
沿側(cè)壁緩慢加入預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基（體積與原培養(yǎng)基一致，如T25瓶加5ml）。
避免直接沖擊細胞層，防止細胞脫落。
（5）放回培養(yǎng)箱：
擰松培養(yǎng)瓶蓋（保證氣體交換），平穩(wěn)放回37℃、5% CO?培養(yǎng)箱。
3、后續(xù)處理
舊培養(yǎng)基需高壓滅菌（生物污染風(fēng)險）后丟棄。
記錄換液時間、細胞密度及形態(tài)變化。
四、注意事項
1、無菌操作：
全程在超凈臺酒精燈火焰附近操作。
試劑瓶口過火后開閉，移液管勿觸碰其他物品。
2、溫度控制：
培養(yǎng)基和PBS需嚴(yán)格預(yù)熱至37℃，避免冷刺激導(dǎo)致細胞脫落。
3、輕柔操作：
吸液時槍頭勿接觸細胞層（尤其貼壁不牢的細胞如原代細胞）。
4、特殊細胞處理：
懸浮細胞：換液需離心收集細胞，保留沉淀后重懸于新培養(yǎng)基。
半貼壁細胞：部分細胞可能漂浮，可保留少量舊培養(yǎng)基。
五、常見問題
1、換液后細胞死亡：
可能原因：操作力度過大、PBS殘留、培養(yǎng)基pH異?；蛭廴尽?/div>
處理：檢查試劑有效期，縮短換液時間，規(guī)范無菌操作。
2、細胞污染：
若培養(yǎng)基渾濁或出現(xiàn)異常顆粒，立即停止操作，高壓滅菌丟棄，并用75%酒精清潔培養(yǎng)箱。
3、細胞脫落：
減少PBS沖洗次數(shù)，動作輕柔，或改用含鈣/鎂的緩沖液（維持貼附）。
六、擴展提示
首次換液前：確認細胞貼壁情況。
高密度細胞：可適當(dāng)增加換液頻率。
無血清培養(yǎng)：換液需更頻繁。
通過規(guī)范換液操作，可顯著提高細胞實驗的穩(wěn)定性和重復(fù)性。若需進一步優(yōu)化，建議根據(jù)特定細胞系的培養(yǎng)手冊調(diào)整細節(jié)。
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